噬菌体疗法治疗酵母菌多重耐药再添一篇好文

°C 下在 6 至 8 的 pH 素质下依然活性，当PH

上图2 A. salmonicida酵母菌vB_AsM_ZHA、vB_AsM_ZHD和vB_AsM_ZHF的海洋生物科学优点。

A. salmonicida品种的繁殖切线相对来说，在0.01至100 MOI的在此之前25h内，每个酵母菌分立物都列于现出新可遵从的杀灭能力。在100 MOI条件下，酵母菌ZHD 脑膜炎的处死鳟鱼为在25h开始重一新繁殖，而用ZHA和ZHF脑膜炎的微海洋生物分别在40h和45h恢复原繁殖，其里脑膜炎酵母菌ZHF的病原体在60h时恢复原率最少。该微海洋生物的自燃规格最大、病原体再生时间最长、可借MOI最少，这些特征声称，ZHF对A. salmonicida subsp. masoucida的体外繁殖很强众所周知的杀灭活性。因此，酵母菌 ZHF 运用于后续的试验研究课题。

上图3 表明酵母菌 (vB_AsM_ZHA、vB_AsM_ZHD 和 vB_AsM_ZHF) 在 MOI 为 100、10、1、0.1 和 0.01 时对A. salmonicida (AS) 繁殖的杀灭发挥作用的繁殖切线。

酵母菌 vB_AsM_ZHF 的真核海洋生物系统性。

酵母菌ZHF真核海洋生物是一个线性DNA，由 161,887 bp 三一组，GC 浓度为 41.24%；ORFs 237个，%真核海洋生物的149,784 bp（92.52%），平均弧度为632 bp。ORFs由40个结构设计和包装亚基亚基质、27个DNA复制/修饰亚基质、16个核苷酸管控亚基质、14个细胞内亚基质、3个宿主裂解亚基质和107个也就是说亚基真核海洋生物成。毒力亚基质和大肠杆菌性剂亚基质系统性未有断定就其亚基质。ZHF或许是一种致癌性酵母菌，因为在真核海洋生物里未断定整合酶亚基质，使其成为非常适合酵母菌病患的酵母菌。

ANI系统性结果表明，没有已知的酵母菌真核海洋生物与ZHF真核海洋生物列于现出新 100% 大致相同的真核海洋生物同源性，这证实了它的一新颖性。全真核海洋生物真核海洋生物比对声称，与其他酵母菌微海洋生物相对，酵母菌 ZHF 与气单胞菌酵母菌完全大致相同性较低。虽然A. salmonicida酵母菌AS-gz的多个亚基质在真核海洋生物里的排列方式将不同，但它们在 ZHF 里沿用了高 ANI 值。酵母菌 phiAS4 和 AES508 以及窄食单胞菌酵母菌 IME13 的许多亚基质真核海洋生物与ZHF大致相同。其他被系统性的酵母菌很强与 ZHF 同源的结构设计亚基，但与其他亚基质的完全大致相同性较少。

上图4 处死鳟鱼为酵母菌vB_AsM_ZHF的真核海洋生物特征及比较系统性。

酵母菌 vB_AsM_ZHF 对A. salmonicida subsp.masoucida的病患效果。

在大菱鲆里创设A. salmonicida subsp.masoucida的单打独斗模型，每三组20只大菱鲆遵从 1*104、1*105或1*106 CFU/鱼为的i.m.单打独斗。接种后 20 天 (dpi) 的生存率共五 60%、10% 和 0%。考虑 8*104 CFU/鱼为作为A. salmonicida subsp.masoucida的反击副发挥作用，在几周的试验里大菱鲆脑膜炎了该菌，通过ZHF病患断定，ZHF有或许保障大菱鲆不受A. salmonicida subsp.masoucida的不作为。

上图5 用 8 * 104 CFU/鱼为和酵母菌 vB_AsM_ZHF (ip) 以 8 * 102 PFU/鱼为 (MOI 为 0.01)、8 * 104 PFU/鱼为的副发挥作用解决问题的大菱鲆的生存率。

在肝细胞评核病原体超重和酵母菌滴度，以列于征ZHF对A. salmonicida subsp.masoucida的动态优点，结果断定在甲状腺和甲状腺里病原体超重和酵母菌滴度的变化趋势完全大致相同。在以前的2天，甲状腺和甲状腺里未检测到病原体定植，但在几周的几天里逐渐增加。与 104 CFU/g 的阳性比对相对，病患三组的病原体超重上升至约 103 CFU/g。在竖肾脏三其组织里，病患三组的病原体超重在8天内依然大于阳性比对，并且稳定增长。在在此之前2天，病患三组和比对三组之间的酵母菌滴度没有差异，但病患三组的酵母菌滴度比比对三组增高得较慢。在甲状腺和甲状腺里，解决问题三组里酵母菌滴度迅速增高8 dpi；而在比对三组里，酵母菌ZHF被完全除去。与其他器官相对，竖肾脏三其组织里除去ZHF的更快较慢。综上所述，ZHF有效率消除了竖肾脏三其组织脑膜炎的病原体支出，大菱鲆的神经系统对酵母菌的除去很强延缓发挥作用。

上图6 1、2、4 和 8 dpi 时甲状腺、甲状腺和肾脏脏里的病原体超重（左轴）和酵母菌滴度（右轴）。

A.salmonicida subsp. masoucida 的抗炎发挥作用。

神经肉三其组织病理切片表明，A. salmonicida subsp. masoucida在8dpi时可导致发炎细胞显现出新来，酵母菌病患后可非常大减低发炎细胞的使用量进而达到比对三组的素质。ZHF比起病原体脑膜炎三组1至4 dpi降低血浆里白细胞介素1b（IL-1b）素质，并且在8 dpi时血浆TNF-a和γ干扰素（IFN-g）素质大于比对三组dpi。发炎也就是说（IL-1b、IL-6、IFN-g、转化繁殖也就是说 b [TGF-b]、骨髓发炎也就是说 α [TNF-a] 和铁调素）在 1、2、4、通过实时系统性 PCR 测量甲状腺、甲状腺和竖肾脏里的 8 dpi，并通过热上图进行时可视化 。病患三组的 TGF-b 素质高于脑膜炎三组，相比之下是在 8 dpi 时。相对之下，病患三组第8天IL-1b、第1天IL-6、第2天和第4天甲状腺里的IFN-g、第8天铁调素素质大于脑膜炎三组。这些相对来说，酵母菌化学疗法有效率降低了肝细胞发炎素质。

上图7 肝细胞酵母菌化学疗法的抗炎发挥作用

研究课题结论

1. 从污染物里分立了一种一一新A. salmonicida subsp. masoucida酵母菌ZHF，并对其海洋生物科学优点进行时了鉴定；

2. 对全真核海洋生物进行时PCR系统性，未断定口服大肠杆菌性剂性或毒力亚基质；

3. 酵母菌病患模型在大菱鲆肝细胞创设和验证了给药剂方式将，结果断定ZHF在在降低了死亡率、病原体支出和发炎反应，且没有相比的副发挥作用。

综上所述，本研究课题均是由了一种开发酵母菌化学疗法来高度集中多重口服大肠杆菌性剂性A. salmonicida subsp. masoucida的解决方案。

本研究课题的denovoPCR和部分数据系统性由北京派森诺海洋生物科技有限公司完成。

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